- 孙淑妍;张华坤;周紫如;李锋;崔晓宾;
目的:探讨鳞状上皮热休克蛋白53 (CRNN)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况,并评估其对ESCC细胞Eca9706细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测CRNN蛋白在93例ESCC组织和101例癌旁正常食管上皮组织中的表达,并分析CRNN表达水平与ESCC患者临床病理特征及生存预后之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CRNN水平对ESCC的预测效能。将Eca9706细胞分为对照组和CRNN组(过表达CRNN),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测2组Eca9706细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组Eca9706细胞迁移细胞数,平板克隆形成实验检测2组Eca9706细胞克隆形成数,流式细胞术检测2组Eca9706细胞凋亡率。结果:与癌旁正常食管上皮组织比较,ESCC组织中CRNN蛋白表达强度明显降低(χ~2=23.476,P<0.001);ESCC组织中CRNN蛋白表达下调与肿瘤部位(χ~2=5.353,P=0.021)和组织学分级(χ~2=4.434,P=0.035)存在关联,与患者年龄(χ~2=0.102,P=0.750)、性别(χ~2=0.050,P=0.822)、肿瘤分期(χ~2=0.047,P=0.828)和淋巴结转移(χ~2=0.553,P=0.457)均无关联。生存分析,CRNN蛋白高表达组ESCC患者预后优于CRNN蛋白低表达组(P=0.013)。单因素Cox比例风险回归分析,ESCC患者总生存率与CRNN蛋白表达水平[风险比(HR)=0.198,95%置信区间(CI):0.047～0.842,P=0.028]和肿瘤分期(HR=2.479,95%CI:1.247～4.929,P=0.010)存在关联;多因素Cox比例风险回归分析,CRNN蛋白表达水平(HR=0.213,95%CI:0.050～0.895,P=0.035)和肿瘤分期(HR=2.391,95%CI:1.198～4.772,P=0.013)是ESCC预后的独立因素。与对照组比较,CRNN组Eca9706细胞增殖活性明显降低(P=0.004),克隆形成数明显减少(P=0.002),迁移细胞数明显降低(P=0.002),细胞凋亡率明显升高(P=0.006)。结论:CRNN蛋白在ESCC组织中表达水平较低,提示患者预后不良。过表达CRNN蛋白可能抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。
2025年02期 v.51;No.312 275-283页 [查看摘要][在线阅读][下载 1304K] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：60 ] - 卢梦云;韩语诚;胡溢洪;何旻蕙;张艳群;邹先琼;
目的:探讨人类糖脂转运蛋白(GLTP)对胰腺癌(PC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析平台(UALCAN)数据库分析PC组织和正常胰腺组织中GLTP蛋白表达差异,以及不同临床病理特征PC患者PC组织和正常胰腺组织中GLTP蛋白表达的差异。体外培养人PC细胞PANC-1细胞,分为对照组(转染pFLAG-CMV4质粒)和GLTP过表达(GLTP-OE)组(转染pFLAG-GLTP质粒),采用抗生素筛选法建立稳定转染GLTP的细胞;敲低实验采用非特异siRNA转染PANC-1细胞作为对照组,si-GLTP转染PANC-1细胞作为si-GLTP组。采用Western blotting法检测细胞中GLTP蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测PANC-1细胞的增殖活性,克隆形成实验检测PANC-1细胞克隆形成数,Transwell小室实验检测PANC-1细胞的迁移及侵袭细胞数;转录组测序分析GLTP影响PANC-1细胞的潜在作用机制;Western blotting法检测各组PANC-1细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RTqPCR)法检测各组细胞中双调蛋白(AREG)和激酶插入域受体(KDR) mRNA表达水平。小鼠随机分为对照组(注射pFLAG-CMV4转染的PANC-1细胞)和实验组(注射pFLAG-GLTP稳定转染的PANC-1细胞),制备小鼠皮下移植瘤模型,检测2组小鼠移植瘤体积和质量。结果:UALCAN数据库分析,PC组织中GLTP蛋白表达水平低于正常胰腺组织(P<0.01),且不同癌症分期(P<0.05)、肿瘤分级(P<0.05)、年龄(P<0.001)和性别(P<0.05) PC患者PC组织与正常胰腺组织中GLTP蛋白表达水平比较差异有统计学意义。与对照组比较,GLTP-OE组细胞增殖活性(P<0.01)和克隆形成数(P<0.001)明显降低,迁移细胞数(P<0.001)和侵袭细胞数(P<0.01)明显降低。敲低实验,与对照组比较,si-GLTP组细胞增殖活性(P<0.01)和克隆形成数(P<0.05)明显升高,迁移细胞数(P<0.001)和侵袭细胞数(P<0.001)明显升高。与对照组比较,实验组小鼠注入肿瘤细胞4周后,肿瘤质量和体积降低(P<0.01)。过表达实验,与对照组比较,GLTP-OE组细胞中p-PI3K (P<0.01)、p-Akt-S473 (P<0.01)和p-Akt-T308 (P<0.05)蛋白表达水平降低,AREG (P<0.01)和KDR (P<0.01) mRNA表达水平降低。敲低实验,与对照组比较,si-GLTP组细胞中p-PI3K (P<0.01)、p-Akt-S473 (P<0.01)和p-Akt-T308 (P<0.01)蛋白表达水平升高,AREG (P<0.01)和KDR (P<0.05) mRNA表达水平升高。结论:GLTP在PC组织中呈低表达。GLTP过表达能抑制PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制裸鼠皮下移植瘤生长,其可能的作用机制与降低PI3K/Akt信号通路活性有关。
2025年02期 v.51;No.312 284-295页 [查看摘要][在线阅读][下载 1560K] [下载次数：53 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：32 ] - 张重阳;罗佳;秦雪;孙攀喜;魏丽丽;于秀石;
目的:探讨樱黄素对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠神经元的保护作用,并阐明其可能的机制。方法:36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量樱黄素组(3.5 mg·kg~(-1))、中剂量樱黄素组(7.0 mg·kg~(-1))、高剂量樱黄素组(14.0 mg·kg~(-1))和阳性药依达拉奉(Eda)组,每组6只。采用Zealonga法评价各组大鼠神经功能损伤程度,旷场实验检测各组大鼠自主运动功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死面积,HE染色和尼氏染色观察各组大鼠脑组织病理形态表现。另取21只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、樱黄素组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、p38抑制剂组、JNK抑制剂+樱黄素组和p38抑制剂+樱黄素组,每组3只。采用TUNEL染色检测各组大鼠神经元的凋亡情况,Western blotting法检测各组大鼠脑梗死侧脑组织中凋亡相关蛋白和JNK/p38通路相关蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.001),大鼠总运动距离缩短(P<0.001),脑梗死面积占比升高(P<0.001)。假手术组大鼠脑组织神经元结构清晰,排列有序,尼氏小体数量丰富,未发现明显的病理变化。与模型组比较,中和高剂量樱黄素组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.05),总运动距离增加(P<0.05),脑梗死面积占比降低(P<0.05),神经元出现排列紊乱、细胞质浓缩、细胞核固缩和尼氏小体溶解脱失的现象减轻。与假手术组比较,模型组大鼠神经元凋亡阳性率明显升高(P<0.001),大鼠脑组织中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和cleaved Caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,樱黄素组大鼠神经元凋亡阳性率明显降低(P<0.05),大鼠脑组织中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。与抑制剂组比较,抑制剂+樱黄素组大鼠神经元凋亡阳性率降低(P<0.01),大鼠脑组织中p-JNK和p-p38蛋白表达水平均降低(P<0.05),p-JNK/JNK和p-p38/p38比值均降低(P<0.05)。结论:樱黄素具有减轻大鼠神经功能损伤、减小脑梗死面积、减轻病理损伤和抑制神经元凋亡的作用,其作用机制可能与调控JNK/p38信号通路抑制神经元有关。
2025年02期 v.51;No.312 296-306页 [查看摘要][在线阅读][下载 1602K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：23 ] - 邓静;王萱;石长玉;杨斯琦;邹亲玲;金明;
目的:探讨一叶秋碱(SEC)对人结肠癌细胞系SW620细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将皮下移植肿瘤模型裸鼠分为对照组(n=6)、奥沙利铂(OXA)组(n=7)和SEC组(n=7),检测各组裸鼠皮下移植瘤体积和质量并计算肿瘤抑制率。将不同剂量SEC (5～120μmol·L~(-1))分别作用于SW620细胞12、24、48和72 h,细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组细胞存活率,确定SEC最适药物剂量。将SW620细胞分为对照组、20μmol·L~(-1)SEC组、40μmol·L~(-1) SEC组和40μmol·L~(-1) OXA组。采用TUNEL染色法和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光染色法和流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组细胞中细胞色素C、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK (p-JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p38、磷酸化p38 (p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK (p-ERK)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,SEC组裸鼠皮下移植瘤体积及质量明显减小(P<0.05或P<0.01或P<0.001);SEC组和OXA组肿瘤抑制率分别为20.42%及6.50%。CCK-8法检测,与0μmol·L~(-1) SEC比较,SEC剂量大于20μmol·L~(-1)时,SW620细胞存活率明显降低(P<0.001);选定20μmol·L~(-1) SEC、40μmol·L~(-1) SEC和24 h作为细胞后续实验干预剂量及时间。TUNEL法检测,与对照组比较,20和40 mol·L~(-1) SEC组细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.001);流式细胞术检测,与对照组比较,40μmol·L~(-1) SEC组细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。JC-1染色法检测,与对照组比较,20和40μmol·L~(-1) SEC组线粒体膜电位降低(P<0.001)。DCFH-DA荧光染色法检测,与对照组比较,20和40μmol·L~(-1) SEC组及40μmol·L~(-1) OXA组细胞中ROS水平明显升高(P<0.001);流式细胞术检测,与对照组比较,40μmol·L~(-1) SEC组细胞中ROS水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,20和40μmol·L~(-1) SEC组及40μmol·L~(-1) OXA组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞色素C和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。与对照组比较,20和40μmol·L~(-1) SEC组细胞中p-JNK/JNK、p-p38/p38及p-ERK/ERK比值均明显升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论:SEC可抑制SW620细胞增殖,增加细胞中ROS水平,降低细胞线粒体膜电位,诱导线粒体凋亡;其作用机制可能与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控有关。
2025年02期 v.51;No.312 307-316页 [查看摘要][在线阅读][下载 1294K] [下载次数：33 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：11 ] - 杨英;赵亮;由涌;许倩;杨振军;
目的:观察17β-雌二醇(17β-E2)对原代培养海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:提取新生24 h内SD大鼠海马组织NSCs,分为对照组和17β-E2组。采用免疫荧光法检测2组NSCs中巢蛋白(Nestin)和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)的表达情况,计算NSCs增殖率。Western blotting法检测NSCs中Nestin蛋白表达水平,流式细胞术检测不同细胞周期NSCs百分率。采用免疫荧光法检测NSCs分化后神经元标志物βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,计算神经元与星形胶质细胞的相对比值。Western blotting法检测NSCs分化后βⅢ-tubulin、GFAP以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)等PI3K/Akt/GSK-3β通路相关蛋白的表达水平。结果:免疫荧光法,2组NSCs中Nestin均阳性表达,与对照组比较,17β-E2组NSCs增殖率明显升高(P<0.01);Western blotting法,与对照组比较,17β-E2组NSCs中Nestin蛋白表达水平升高(P<0.05)。流式细胞术,与对照组比较,17β-E2组S期NSCs百分率明显升高(P<0.01)。免疫荧光法,与对照组比较,17β-E2组神经元与星形胶质细胞的相对比值明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与对照组比较,17β-E2组NSCs分化后βⅢ-tubulin蛋白表达水平升高(P<0.05),GFAP蛋白表达水平降低(P<0.01),Akt、p-Akt、β-catenin和p-GSK-3β蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:17β-E2可以促进NSCs增殖并促使其向神经元方向分化,其作用机制可能与PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。
2025年02期 v.51;No.312 317-324页 [查看摘要][在线阅读][下载 1616K] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 黎涵玥;阳莲;刘剑锋;张舒飞;洪莉;
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对L929细胞增殖和其胶原表达水平的影响,阐明其相关作用机制。方法:提取4周龄C57BL/6小鼠的BMSCs。采用免疫荧光染色鉴定BMSCs的表型。将L929细胞分为对照组(L929细胞)、共培养组(L929细胞与BMSCs)、Janus激酶(JAK)抑制剂WP1066组(WP1066处理L929细胞与BMSCs)和二甲基亚砜(DMSO)组(DMSO处理L929细胞与BMSCs)。细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测不同时间点各组L929细胞增殖活性,Western blotting法检测各组L929细胞中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达水平,免疫荧光染色法检测各组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达。结果:BMSCs表面抗原(SA)荧光检测,BMSCs表达表面标志物CD29+、CD45-、CD90+和CD105+。CCK-8法检测,与对照组比较,共培养组L929细胞增殖活性明显升高(P<0.01),DMSO组L929细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,共培养组和DMSO组L929细胞中ColⅠ及ColⅢ蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与DMSO组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色法检测,与对照组比较,共培养组和DMSO组L929细胞中ColⅠ及ColⅢ荧光强度明显升高(P<0.01);与共培养组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ荧光强度明显降低(P<0.01);与DMSO组比较,WP1066组L929细胞中ColⅠ和ColⅢ荧光强度明显降低(P<0.01)。结论:间充质干细胞可通过JAK2/信号转导和转录激活子3 (STAT3)信号通路促进小鼠L929细胞增殖及胶原生成。
2025年02期 v.51;No.312 325-332页 [查看摘要][在线阅读][下载 1342K] [下载次数：314 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：22 ] - 李亮;周向东;王杰;徐超群;朱梦霞;余善君;李琪;
目的:探讨苦味受体2型味觉受体(T2R) 38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:人气道上皮NuLi-1细胞分为对照组(不进行任何处理)、香烟提取物(CSE)组(5%CSE处理细胞24h)和CSE+T2R38特异性激动剂苯基硫脲(PTC)组(CSE+PTC组)(5%CSE和1 mmol·L~(-1)PTC处理细胞24h)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组NuLi-1细胞中T2R38的mRNA及蛋白表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞活性,试剂盒检测各组细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型NOS(eNOS)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,DAX-J2红色荧光探针法检测各组细胞中一氧化氮(NO)水平,荧光探针试剂盒检测各组细胞中ROS水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中丙二醛(MDA)、Fe~(2+)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子红细胞2相关因子2 (Nrf2)和谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPx4)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞中T2R38 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞活性降低(P<0.05),细胞中iNOS和SOD活性升高(P<0.05),NO和ROS水平升高(P<0.05),MDA和Fe~(2+)水平升高(P<0.05),细胞中GSH水平降低(P<0.05),Nrf2和GPx4蛋白表达水平降低(P<0.05)。与CSE组比较,CSE+PTC组NuLi-1细胞活性升高(P<0.05),细胞中SOD活性升高(P<0.05),GSH水平升高(P<0.05),细胞中iNOS活性降低(P<0.05),NO和ROS水平降低(P<0.05),MDA和Fe~(2+)水平降低(P<0.05),细胞中Nrf2和GPx4蛋白表达水平升高(P<0.05)。对照组、CSE组和CSE+PTC组细胞中eNOS活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:激活苦味受体T2R38可抑制香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡,其主要机制可能与降低细胞中iNOS活性有关。
2025年02期 v.51;No.312 333-340页 [查看摘要][在线阅读][下载 1144K] [下载次数：59 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 王妍;赵邹宇;于盼盼;杨萍;
目的:探讨IκB激酶相互作用蛋白(IKBIP)在宫颈癌组织肿瘤细胞(TCCCT)中的表达与患者临床病理特征和预后的关系及其对宫颈癌(CC) HeLa和SiHa细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法:采用GENT2数据库和Kaplan-Meier (K-M) plotter数据库分析CC及正常宫颈组织中的IKBIP mRNA表达水平差异以及其表达水平与CC患者临床预后的关系。基因集富集分析(GSEA)软件中选取参考基因集为Hallmark,进行相关通路富集。采用免疫组织化学法检测IKBIP蛋白在TCCCT和正常宫颈组织上皮细胞(ECNCT)中的表达情况,分析其表达水平与CC患者临床病理特征和预后的关系;单因素和多因素Cox回归分析影响CC患者预后的危险因素。构建IKBIP敲低的CC细胞(HeLa和SiHa细胞),实验分为sh-NC组和sh-IKBIP组;采用Western blotting法评估各组细胞中IKBIP蛋白表达情况;细胞计数试剂盒8 (CCK-8)和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法检测各组细胞增殖活性及EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail蛋白表达水平。结果:GENT2数据库分析,CC组织中IKBIP mRNA表达水平高于正常宫颈组织(P<0.001)。GSEA富集分析,上皮-间质转化(EMT)通路位于IKBIP高表达组的第1位。免疫组织化学法,TCCCT中IKBIP蛋白阳性表达率高于ECNCT (50.5%vs 8.0%),且其过表达与FIGO分期(2018)和肿瘤分化程度有关联(P<0.05);单因素和多因素Cox回归分析,淋巴结转移(LNM)和IKBIP高表达是影响CC患者总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)的独立危险因素(P<0.05)。Western blotting法,与sh-NC组比较,sh-IKBIP组细胞IKBIP蛋白表达水平明显降低(P<0.05);CCK-8和EdU法,与sh-NC组比较,sh-IKBIP组细胞增殖活性和EdU阳性百分率均明显降低(P<0.05);Transwell小室实验,与sh-NC组比较,sh-IKBIP组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。Western blotting法,与sh-NC组比较,sh-IKBIP组细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),N-cadherin和Snail蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:IKBIP蛋白在CC细胞中高表达,且与CC患者不良预后有密切关联。下调IKBIP蛋白表达可抑制CC细胞的增殖、迁移和侵袭能力及EMT进程。
2025年02期 v.51;No.312 341-351页 [查看摘要][在线阅读][下载 1654K] [下载次数：45 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：23 ] - 王岳;马宁;卢嘉骏;王成瑶;陈琳渝;任宇晨;李景武;孙红;
目的:探讨新型复合水凝胶对过氧化氢(H_2O_2)诱导心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:小鼠皮下注射水凝胶100μL,1、14和28 d正常饲养后处死小鼠,取材,HE染色观察水凝胶的组织相容性。提取出生1d SD大鼠的原代心肌细胞,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。原代心肌细胞分为对照组、H_2O_2组和水凝胶(H_2O_2+Hydrogel)组。对照组原代心肌细胞正常培养,H_2O_2组原代心肌细胞采用200μmol·L~(-1)H_2O_2溶液处理24 h;H_2O_2+Hydrogel组原代心肌细胞采用1 g·L~(-1)的水凝胶与200μmol·L~(-1)H_2O_2共孵育24 h。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组心肌细胞活性,双氢乙啶(DHE)和2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测各组心肌细胞中活性氧(ROS)水平,鬼笔环肽荧光染色标记法检测各组心肌细胞中纤维形肌动蛋白(F-actin)表达情况,免疫荧光法检测各组心肌细胞中连接蛋白43 (Cx43)和心肌肌钙蛋白T (cTnT)表达情况,TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测各组心肌细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果:HE染色,水凝胶周围组织炎性细胞浸润较少,皮下埋植的炎症反应较小。与对照组比较,H_2O_2组心肌细胞活性明显降低(P<0.05),细胞中ROS水平明显升高(P<0.05),细胞中Cx43、cTnT和F-actin蛋白表达水平明显降低(P<0.001),心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.01),心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.001),Bax蛋白表达水平降低(P<0.01);与H_2O_2组比较,H_2O_2+Hydrogel组心肌细胞活性明显升高(P<0.05),细胞中ROS水平明显降低(P<0.01),细胞中cTnT、Cx43和F-actin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.001),心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01),Bax蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:水凝胶能够通过清除环境中的ROS促进心肌细胞相关蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡,发挥对氧化应激环境下心肌细胞的保护作用。
2025年02期 v.51;No.312 352-359页 [查看摘要][在线阅读][下载 1321K] [下载次数：54 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ] - 江俊杰;武皓;何康;伞志强;杨擎;李辉;李娜;
目的:制备新型人参多肽温敏水凝胶,观察其对大鼠热源性皮肤损伤的修复作用并探讨其机制。方法:使用Pluronic F127和β-甘油磷酸钠(β-GP)制备温敏水凝胶,评估其相变温度、空间结构、元素组成和保水能力。建立大鼠热源性皮肤损伤模型,分为PBS组、凝胶(Gel)组和人参多肽凝胶(GP-Gel)组。分别处理大鼠创面11 d后,采用HE和Masson染色观察各组大鼠创面形态学改变和胶原沉积情况。免疫组织化学法检测各组大鼠皮肤创面组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞增殖标志物Ki67、表皮生长因子(EGF)、CD31、血管内皮生长因子(VEGF)、P50和P65蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠皮肤创面中Toll样受体4 (TLR4)蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素15 (IL-15)和白细胞介素10 (IL-10)水平。结果:与PBS组和Gel组比较,GP-Gel组大鼠创面减小(P<0.01),皮肤组织中PCNA、Ki67、EGF、CD31、VEGF、α-SMA和CTGF蛋白表达水平增加(P<0.05或P<0.01),P65和TLR4蛋白表达水平降低(P<0.01),血清中抗炎因子IL-10水平增加(P<0.01),促炎因子TNF-α、 IL-1β、IL-6和IL-15水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:人参多肽温敏水凝胶通过促进细胞增殖、纤维增生、血管生成及减少炎症反应,促进热源性皮肤损伤的修复。
2025年02期 v.51;No.312 360-369页 [查看摘要][在线阅读][下载 2173K] [下载次数：664 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 牛凯琦;昌贺;律广富;郑彭予;迟雪婷;周佳;王雨辰;黄晓巍;
目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对顺铂(CDDP)所致小鼠肝损伤的抑制作用,并阐明其可能的作用机制。方法:40只体质量为18～22 g的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组、AS-Ⅳ组和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)+AS-Ⅳ组。对照组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水,连续给药9d;AS-Ⅳ组和Compound C+AS-Ⅳ组小鼠灌胃AS-Ⅳ水溶液(150 mg·kg~(-1)·d~(-1));实验第6天Compound C+AS-Ⅳ组小鼠腹腔注射Compound C (20 mg·kg~(-1));第7天除对照组小鼠腹腔注射生理盐水外,其余各组小鼠腹腔注射20 mg·kg~(-1) CDDP建立小鼠肝损伤模型,48 h后处死小鼠。收集各组小鼠血清和肝组织,采用试剂盒检测各组小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平,HE染色法观察各组小鼠肝组织病理形态学表现,免疫组织化学染色法检测各组小鼠肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)、铁蛋白重链1 (FTH1)和铁死亡抑制蛋白1 (FSP1)的蛋白表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肝组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1 (HO-1)和AMPK蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠血清中AST和ALT水平明显升高(P<0.01),肝组织中SOD和CAT活性明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,AS-Ⅳ组小鼠血清中AST和ALT水平明显降低(P<0.01),肝组织中MDA水平降低(P<0.01),SOD和CAT活性升高(P<0.01);与AS-Ⅳ组比较,Compound C+AS-Ⅳ组小鼠血清中AST和ALT水平升高(P<0.01),肝组织中MDA水平升高(P<0.05),SOD和CAT活性降低(P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组小鼠肝脏损伤程度增强,肝细胞排列紊乱,部分肝细胞水肿;与模型组比较,AS-Ⅳ组小鼠肝脏形态恢复正常;与AS-Ⅳ组比较,Compound C+AS-Ⅳ组小鼠肝细胞排列紊乱且边缘较为模糊。免疫组织化学法,与对照组比较,模型组小鼠肝组织中GPX4、FTH1和FSP1蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,AS-Ⅳ组小鼠肝组织中GPX4、FTH1和FSP1蛋白表达水平升高(P<0.05);与AS-Ⅳ组比较,Compound C+AS-Ⅳ组小鼠肝组织中GPX4、FTH1和FSP1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,模型组小鼠肝组织中Nrf2、HO-1和AMPK蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,AS-Ⅳ组小鼠肝组织中Nrf2、HO-1和AMPK蛋白表达水平升高(P<0.01);与AS-Ⅳ组比较,Compound C+AS-组小鼠肝组织中Nrf2、HO-1和AMPK蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:AS-Ⅳ可以减轻CDDP引起的小鼠肝损伤,其作用机制可能与AS-Ⅳ调控AMPK/Nrf2/HO-1信号通路及铁死亡有关。
2025年02期 v.51;No.312 370-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 1418K] [下载次数：83 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 蔡文畅;刘雨齐;王涵;王鹤霖;王振江;肖梓屾;马士远;安丽萍;刘艳波;
目的:利用生物信息学技术探讨蛋白激酶D2 (PRKD2)在膀胱癌(BLCA)组织中的表达及其表达对BLCA患者预后的影响,阐明PRKD2在BLCA发生发展中的作用。方法:从UCSC癌症基因组数据库下载9例正常膀胱样本、19例BLCA癌旁样本和407例BLCA肿瘤样本的数据。采用Mann-Whitney U检验分析PRKD2 mRNA在BLCA肿瘤组织与正常膀胱组织中的表达差异,并利用人类蛋白数据库(HPA)进行蛋白组学的验证。使用R软件的DESeq2包对PRKD2低表达组和PRKD2高表达组BLCA样本进行差异表达基因(DEGs)筛选及鉴定,使用ggplot2包绘制PRKD2的共表达热图,利用基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对DEGs进行GO功能注释及KEGG信号通路富集分析,并使用基因富集分析(GSEA)获得DEGs明显富集的基因集。根据PRKD2的表达水平将BLCA样本分为低表达组和高表达组,使用GSVA包分析BLCA患者PRKD2表达与免疫细胞浸润之间相关性。使用survival包和survminer包进一步分析PRKD2与BLCA患者预后的关系。使用cBioPortal数据库对BLCA组织的PRKD2基因突变情况进行分析。收集膀胱炎、膀胱息肉和BLCA组织,使用免疫组织化学染色技术检测BLCA及对照组织中白细胞介素17F (IL-17F)蛋白表达水平。结果:PRKD2在多种恶性肿瘤组织中高表达,BLCA组织中PRKD2 mRNA和蛋白表达水平较正常膀胱组织明显升高(P<0.05)。对PRKD2单基因差异分析共得到1 058个DEGs,其中上调DEGs 29个,下调DEGs 1 029个。GO功能注释和KEGG信号通路富集分析,DEGs主要富集于涉及感官知觉的化学刺激、卡哈尔体和内肽酶抑制剂活性等生物学过程(BP)以及金黄色葡萄球菌感染通路和年轻人的成熟型糖尿病通路。GSEA分析,DEGs主要富集于Notch信号通路、维甲酸诱导基因I (RIG-I)样受体信号通路、胞质DNA筛选通路、碱基切除修复信号通路、自然杀伤(NK)细胞介导细胞毒性信号通路和T细胞受体信号通路等过程。免疫浸润分析,PRKD2的表达与活化的树突状细胞(aDC)、NK细胞中的CD56dim亚群(NK CD56dim cells)和中央记忆型T细胞(Tcm)等5种细胞呈正相关关系(P<0.05),与巨噬细胞、效应记忆T细胞(Tem)和浆细胞样树突状细胞(pDC)呈负相关关系(P<0.05)。临床特征亚组分析,年龄超过70岁以及发生淋巴管侵袭的BLCA患者PRKD2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PRKD2 mRNA表达水平较高的BLCA患者总生存期(OS)、疾病特异性生存期(DSS)和无进展间隔期(PFI)明显长于PRKD2mRNA表达水平较低者(P<0.05)。单因素和多因素Cox回归分析,发生远处转移、主要治疗结果和临床病理分期是影响BLCA患者预后的重要因素。基因突变分析,9%的患者出现PRKD2基因突变,包括错义突变、基因扩增、mRNA低表达、mRNA高表达以及多位点突变。免疫组织化学法,与膀胱炎组织比较,BLCA组织中IL-17F蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:BLCA组织中PRKD2表达水平明显升高,PRKD2具有上调IL-17F蛋白表达水平的效应,PRKD2蛋白表达水平降低可能是BLCA患者预后不良的潜在因素。
2025年02期 v.51;No.312 378-391页 [查看摘要][在线阅读][下载 2086K] [下载次数：28 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 白聪聪;周先雷;张志;高爽;张雪梅;
目的:探讨硫酸软骨素蛋白聚糖4假基因12 (CSPG4P12)在小细胞肺癌(SCLC)组织中的表达、与免疫浸润的关系及其对细胞生物学功能的影响,阐明其在SCLC发生发展中的作用。方法:通过ArrayExpress数据库检索获得的SCLC的E-GEOD-60052队列数据,利用R语言Bioconductor包完成数据过滤标准化,并获得63例SCLC肿瘤组织和7例正常组织样本,使用Mann-Whitney U检验分析2组样本中CSPG4P12表达水平差异情况,使用Pearson相关性分析评估CSPG4P12表达水平与47种免疫检查点基因之间的关联。使用ESTIMATE算法和CIBERSORT算法评估CSPG4P12表达与肿瘤免疫细胞浸润之间的关联。采用病例对照研究分析临床资料,选取230例SCLC患者为病例组,230名健康体检者为对照组。采用TaqMan-MGB荧光探针标记法进行CSPG4P12 rs2880765、rs6496932和rs8040855位点基因分型实验,通过非条件Logistic回归模型计算比值比(OR)和95%置信区间(CI),分析CSPG4P12基因多态遗传变异与SCLC发病风险的关联。SCLC DMS114细胞分别转染pUC-57质粒(对照组)和CSPG4P12过表达质粒(OV-CPG4P12组),采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法验证2组细胞中CSPG4P12过表达效率。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测2组细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组迁移细胞数和侵袭细胞数,Hoechst 33342荧光染色法观察2组细胞凋亡情况。结果:ArrayExpress数据库E-GEOD-60052队列分析,与正常组织比较,SCLC肿瘤组织中CSPG4P12 mRNA表达水平明显降低(P<0.001)。CSPG4P12表达与免疫检查点基因白细胞相关免疫球蛋白样受体1 (LAIR1)(r=0.47,P<0.001)、肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员9 (TNFRSF9)(r=0.38,P<0.01)和TNF超家族成员9 (TNFSF9)(r=0.44,P<0.001)均呈正相关关系。ESTIMATE算法,CSPG4P12低表达组患者基质评分、免疫评分和ESTIMATE综合评分均低于CSPG4P12高表达组(P<0.01)。CIBERSORT算法,与CSPG4P12高表达组比较,CSPG4P12低表达组中M0型巨噬细胞浸润增加(P<0.05),静息肥大细胞浸润降低(P<0.05)。CSPG4P12表达水平与静息肥大细胞浸润(r=0.35,P=0.030)和单核细胞浸润(r=0.34,P=0.034)呈正相关关系。病例对照研究,与AA基因型比较,CSPG4P12 rs2880765位点AT和TT基因型携带者患SCLC风险增加(OR=1.68,95%CI=1.15～2.45,P<0.01)。分层分析,在男性、低年龄(≤60岁)及吸烟亚组人群中,rs2880765 A>T遗传变异可增加SCLC发病风险(男性:OR=1.86,95%CI=1.18～2.93,P<0.01;≤60岁:OR=1.73,95%CI=1.11～2.68,P<0.01;吸烟:OR=2.76,95%CI=1.49～5.13,P=0.001)。细胞生物学实验,与对照组比较,在48和72 h时,OV-CSPG4P12组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);24 h时迁移细胞数明显减少(P<0.01),凋亡细胞数明显增加(P<0.05),48 h时侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。结论:CSPG4P12在SCLC肿瘤组织中低表达,与免疫浸润有关联。CSPG4P12 rs2880765 A>T遗传变异可以增加SCLC发病风险,其过表达能抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。
2025年02期 v.51;No.312 392-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 1452K] [下载次数：29 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 胡晓霞;李亚龙;杨东亮;拉巴泽仁;刘欣跃;
目的:探讨不同浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化的诱导作用。方法:将DMEM培养基培养的Raw264.7细胞分为对照组(5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖)、不同浓度高糖组(15.0、25.0、35.0和45.0 mmol·L~(-1)葡萄糖)和阳性对照组[脂多糖(LPS)],分别培养3、6和9h,观察各组细胞形态,细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素10 (IL-10) mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平,流式细胞仪检测各组细胞M1和M2型巨噬细胞标志物CD86+及CD163+细胞百分比。结果:对照组Raw264.7细胞贴壁生长,形态以圆形为主;35.0 mmol·L~(-1)高糖组和阳性对照组细胞拉长、伪足形成,呈现炎症性改变。与对照组比较,作用6、12、24和48 h后不同浓度高糖组细胞存活率均升高(P<0.05)。与对照组比较,作用3h后,35.0 mmol·L~(-1)高糖组细胞中IL-6和IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);作用6h后,35.0 mmol·L~(-1)高糖组细胞中TNF-α mRNA表达水平升高(P<0.001),细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平明显升高(P<0.05或P<0.001);作用3h后,35.0 mmol·L~(-1)高糖组巨噬细胞极化标志物CD86+和CD163+细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.001)。结论:一定高浓度葡萄糖可诱导体外Raw264.7巨噬细胞向M1亚型极化。
2025年02期 v.51;No.312 403-411页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 张雅琪;米靖;杨景荣;李欣明;李利;
目的:探讨微小RNA (miRNA)-31对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长数期DPSCs分为对照组(不处理)、NC组(转染随机序列对照物miRNA)、Agomir组(转染miR-31模拟物agomiR-31)和联合组(转染miR-31模拟物agomiR-31m同时加入XAV939)。转染48 h后采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组DPSCs中miR-31表达水平,MTT法检测各组DPSCs增殖能力,茜素红染色法检测各组DPSCs中钙质沉积,碱性磷酸酶(ALP)染色法检测各组DPSCs成骨分化程度,Western blotting法检测各组DPSCs无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平。结果:对照组和NC组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72 h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组和NC组比较,Agomir组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性均明显升高(P<0.05)。与Agomir组比较,联合组DPSCs中miR-31表达水平,24、48和72h时细胞增殖能力,钙化区面积构成比和ALP活性均明显降低(P<0.05)。对照组和NC组DPSCs中糖原合成酶激酶3β (GSK-3β)、β-catenin和Runt相关转录因子2 (Runx2)蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和NC组比较,Agomir组DPSCs中GSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05),β-catenin和Runx2蛋白表达水平升高(P<0.05);与Agomir组比较,联合组DPSCs中GSK-3β蛋白表达水平升高(P<0.05),β-catenin和Runx2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:上调miR-31可促进DPSCs增殖和成骨分化,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。
2025年02期 v.51;No.312 412-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 1351K] [下载次数：43 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 赵杰瑞;籍铭辛;张钰涵;陈姝彤;郭玉苗;张巍;彭鹏;
目的:探讨胡桃醌通过天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)/蛋白焦孔素E (GSDME)介导焦亡途径对骨肉瘤(OS)细胞(U2OS和MG63细胞)凋亡的影响。方法:体外培养U2OS和MG63细胞,将细胞分为对照组、不同浓度(5、10和20μmol·L~(-1))胡桃醌处理组和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK组(10μmol·L~(-1)胡桃醌+30μmol·L~(-1) Z-DEVD-FMK)。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞程序性死亡率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blotting法检测细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)和裂解的Caspase-3 (cleaved-Caspase-3)等凋亡相关蛋白以及蛋白焦孔素E全长(GSDME-F)和蛋白焦孔素E的N末端(GSDME-N)等焦亡相关活性蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素18 (IL-18)水平。结果:与对照组比较,5、10和20μmol·L~(-1)胡桃醌组细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),U2OS和MG63细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为8.4及10.2μmol·L~(-1);与对照组比较,5和10μmol·L~(-1)胡桃醌组细胞凋亡率和LDH释放率明显升高(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,5和10μmol·L~(-1)胡桃醌组细胞中Bax,cleaved-Caspase-3和cleaved-PARP蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,5和10μmol·L~(-1)胡桃醌组细胞上清液中IL-1β和IL-18水平均升高(P<0.01),cleaved-Caspase-3和GSDME-N蛋白表达水平升高(P<0.01),GSDME-F蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与10μmol·L~(-1)胡桃醌组比较,Z-DEVD-FMK组细胞中cleaved-Caspase-3和GSDME-N蛋白表达水平明显降低(P<0.01),GSDME-F蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胡桃醌可诱导U2OS和MG63细胞凋亡,并引起Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡。
2025年02期 v.51;No.312 420-427页 [查看摘要][在线阅读][下载 1376K] [下载次数：55 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 李佳欣;王一;吴婷婷;郝诗睿;付晓;
目的:探讨槲皮素对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的人永生化角质形成细胞(HACAT)损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:将HACAT细胞分为对照组(正常培养细胞)、5-FU组(7.5 mg·L~(-1) 5-FU作用于HACAT细胞24 h)和低、中及高剂量槲皮素组(25,50和75μmol·L~(-1)的槲皮素与7.5 mg·L~(-1) 5-FU共同作用于HACAT细胞24 h)。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测不同剂量(0、10、25、50、75和100μmol·L~(-1))槲皮素处理后各组HACAT细胞存活率,活性氧(ROS)荧光探针法检测各组HACAT细胞中ROS水平,荧光素标记的AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测HACAT细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组HACAT细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶3 (Cleaved Caspase-3)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素6 (IL-6)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,与0μmol·L~(-1)槲皮素组比较,10、25、50和75μmol·L~(-1)槲皮素组HACAT细胞存活率无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),而100μmol·L~(-1)槲皮素组HACAT细胞存活率明显降低(P<0.05);与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组细胞存活率明显升高(P<0.05)。ROS荧光探针法检测,与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中ROS水平明显降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双染法检测,与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与5-FU组比较,中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05);中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中COX-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);中剂量槲皮素组HACAT细胞中IL-1β和IL-6蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:槲皮素对5-FU诱导的HACAT细胞损伤具有保护作用,其机制可能与减少ROS和COX-2等炎症因子表达从而抑制细胞凋亡有关。
2025年02期 v.51;No.312 428-436页 [查看摘要][在线阅读][下载 1442K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ]
- 刘博;孙超;王旭;马克威;
目的:采用生物信息学方法筛选多原发肺癌(MPLCs)的差异表达基因(DEGs),分析其生物学功能以及对肺腺癌预后的影响。方法:在高通量基因表达综合数据库(GEO)下载GSE200972单细胞转录组测序数据。采用R软件进行数据初步处理后,采用Seurat R包进行数据处理与细胞聚类及注释并得到DEGs。采用clusterProfiler R包进行基因集富集分析(GSEA),采用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络并筛选关键基因(Hub基因),采用基因表达水平值的交互式分析(GEPIA)检测基因在肺腺癌数据库中的表达水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测基因在A549细胞原位移植瘤小鼠肿瘤与正常小鼠肺组织中的表达情况,采用Kaplan Meier-Plotter软件进行预后分析。结果:细胞聚类分析共识别出上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、T细胞和自然杀伤(NK)细胞、B细胞、髓系细胞和肥大细胞共7种细胞类型,以及肿瘤上皮细胞与正常上皮细胞14 605个DEGs。GSEA分析,得到4个在肿瘤样本中发生激活的通路[原癌基因蛋白(MYC)通路、P53通路、氧化磷酸化通路和糖酵解通路]以及1个抑制通路[肿瘤坏死因子α/核因子κB (TNF-α/NF-κB)通路]。筛选PPI网络中的CXC趋化因子8 (CXCL8)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、趋化因子受体4 (CXCR4)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、CXC趋化因子1 (CXCL1)、趋化因子配体2 (CCL2)、黏蛋白1 (MUC1)和分泌型磷蛋白1 (SPP1)为Hub基因。GEPIA数据库分析与动物实验,与肺正常组织比较,在非小细胞肺癌组织中SPP1 mRNA表达水平升高(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线分析,SPP1高表达患者总生存期(OS)短于低表达患者(P<0.01)。结论:MPLCs中不仅有原癌基因相关通路的激活,也有抑癌通路起拮抗肿瘤进展作用,同时非小细胞肺癌中SPP1基因表达水平升高提示有相对较差的预后。
2025年02期 v.51;No.312 437-446页 [查看摘要][在线阅读][下载 1566K] [下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：27 ] - 王小燕;李雪莲;梁斌;田文斐;马海林;莫之婧;
目的:通过生物信息学方法分析人钙腔蛋白(CALU)的表达水平与肝细胞癌(HCC)预后之间的关系,构建HCC预后列线图,并阐明其可能的作用机制。方法:从癌症基因组数据库(TCGA)下载374例HCC组织样本数据,从基因型组织表达数据库(GTEx)下载160例正常组织样本数据。采用配对样本t检验分析在HCC组织样本和配对癌旁正常组织样本中CALU的表达差异,并采用人类蛋白图谱数据库(HPA)进行验证。采用DESeq2包对CALU低和高表达组HCC组织样本进行差异表达基因(DEGs)鉴定,采用pROC包进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,采用单因素和多因素Cox回归分析确定CALU在不同临床病理特征HCC患者中的预后价值,采用ggplot2包绘制森林图,采用rms包和survival包构建列线图及校准图,分析CALU用于区分HCC组织与正常组织的诊断价值。采用Kaplan-Meier Plotter数据库数据对CALU与HCC患者预后的关系进行验证。采用GSE14520数据集中216例HCC样本基因转录表达数据对列线图预测准确性进行验证。采用基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对DEGs进行功能及通路富集分析,采用基因集富集分析(GSEA)获得DEGs显著富集的基因集。采用GSE149614中10例HCC组织样本和8例癌旁正常组织样本单细胞测序数据对CALU与HCC患者预后关系及其作用机制进行验证。结果:与正常组织比较,HCC组织中CALU mRNA表达水平明显升高(P<0.001),HCC组织中CALU蛋白表达量升高。在HCC样本的CALU低表达组和CALU高表达组共发现928个DEGs,包括784个上调DEGs和144个下调DEGs。ROC分析,CALU用于区分癌和癌旁组织具有较高的诊断价值,ROC曲线下面积(AUC)为0.839。生存分析,CALU高表达组HCC患者生存率明显低于CALU低表达组(P<0.001)。单因素和多因素Cox回归分析确定CALU高表达是HCC患者预后的独立危险因素,并构建预后预测列线图。GSE14520数据集数据证实CALU可用于预测HCC预后。GO功能富集分析,上述DEGs主要富集于细胞氧化应激、铁死亡和铜死亡等方面(P<0.05);KEGG通路分析,DEGs富集的通路主要有细胞外基质(ECM)受体互作、亚油酸代谢和神经活性配体受体互作(P<0.05)。GSEA分析,CALU高表达激活细胞周期G_1期到S期、泛素化蛋白聚合反应和HCC进展,CALU低表达则促进HCC细胞氧化应激、铁死亡和铜死亡。单细胞测序分析,CALU mRNA在较高的肿瘤分期HCC细胞亚群中表达水平更高,CALU高表达HCC细胞亚群主要与泛素化、p53和细胞周期有关(P<0.01),CALU低表达HCC细胞亚群主要与细胞氧化应激、铁死亡和组蛋白绑定有关(P<0.01)。结论:CALU高表达可能与HCC患者预后不良存在关联,构建的HCC预后列线图预测患者生存率效果较好。上调CALU可能通过调节细胞周期G_1期到S期和蛋白泛素化以促进HCC进展,而下调CALU可能通过诱导HCC细胞氧化应激、铁死亡和铜死亡从而抑制HCC进展。
2025年02期 v.51;No.312 447-459页 [查看摘要][在线阅读][下载 1891K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：23 ] - 石雨;李景芝;陈洪强;周诗梦;王娜;曹佳;尹俐;刘文斌;
目的:通过生物信息学方法和实验验证,探讨新型双酚类污染物双酚S (BPS)和双酚F(BPF)诱导男性生殖系统损伤的信号通路。方法:生物信息学分析,从比较毒理基因组学数据库(CTD)筛选出与BPF和BPS相关的男性生殖系统疾病基因,并通过基因本体论(GO)的功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测可能的信号通路及关键基因。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测不同浓度(1×10~(-3)、1×10~(-2)、1×10~(-1)、1×10~0、1×10~1和1×10~2μmol·L~(-1))BPS和BPF作用下各组细胞活力;将TM3细胞分为对照组(0.1%DMSO)、不同剂量BPS和不同剂量BPF组,采用20、40和80μmol·L~(-1) BPS及BPF分别处理细胞72 h后,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测各组细胞中关键基因mRNA及蛋白表达水平。结果:生物信息学分析,通过CTD筛选出的分别与BPS及BPF相关的男性系统疾病基因数为507及447个。GO富集分析,筛选出的基因主要富集于生殖系统发育和生殖结构发育等生物过程(BP)。KEGG通路分析,这些基因主要富集于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)、缺氧诱导因子1(HIF-1)和细胞衰老等信号通路(P<0.001)中。实验验证,与对照组比较,1×10~2μmol·L~(-1) BPF和BPS组细胞活力明显降低(P<0.05),1×10~(-3)～1×10~1μmol·L~(-1) BPF和BPS组细胞活力无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。BPS处理后,与对照组比较,低、中和高剂量BPS组细胞中PI3K、AKT、缺氧诱导因子1α (HIF-1α)及CREB结合蛋白(CBP) mRNA表达水平降低(P<0.05),PI3K蛋白表达水平降低(P<0.05),B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平升高(P<0.05),丝氨酸蛋白酶肽酶抑制因子B支成员10 (SERPINB10) mRNA表达水平升高(P<0.01);中和高剂量BPS组细胞中Bax及细胞纤毛内转运同源蛋白80 (IFT80) mRNA表达水平升高(P<0.05);低和高剂量BPS组细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);低和中剂量BPS组细胞中附加性梳基因2 (ASXL2) mRNA表达水平降低(P<0.01)。BPF处理后,与对照组比较,低、中和高剂量BPF组细胞中Bcl-2、HIF-1α及染色体结构维持蛋白质1B (SMC1B) mRNA表达水平降低(P<0.05),IFT80 mRNA表达水平升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平升高(P<0.01);低和高剂量BPF组细胞中PI3K、AKT及环指蛋白130 (RNF130) mRNA表达水平降低(P<0.05);中剂量组BPF细胞中CBP mRNA表达水平降低(P<0.05),RNF130 mRNA表达水平升高(P<0.05);高剂量BPF组细胞中PI3K和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:BPF和BPS可通过PI3K/AKT以及HIF-1信号通路产生生殖细胞毒性,损害男性生殖健康,RNF130和SMC1B可能是其诱导生殖毒性的重要靶点。
2025年02期 v.51;No.312 460-470页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：21 ] - 王潇;熊婵玉;张赟;纪娟娟;周玉;
目的:探讨结直肠癌(COAD)、胆管癌(CHOL)、胆囊癌(GBC)、肝细胞癌(LIHC)、胃腺癌(STAD)和胰腺癌(PAAD) 6种常见消化系统肿瘤患者TP53及KRAS基因突变情况,分析TP53和KRAS基因突变与患者不同临床病理特征、肿瘤突变负荷(TMB)及微卫星不稳定(MSI)的关系。方法:收集2022年1月—2023年12月112例经影像学和病理学诊断为6类常见消化系统肿瘤患者的病理石蜡或活检标本,采用基于杂交捕获的基因测序技术检测不同类型肿瘤患者TP53和KRAS基因突变情况,绘制常见消化系统肿瘤样本突变图谱。按照TMB的高低分为高TMB组和低TMB组。比较不同类型消化系统肿瘤患者TP53和KRAS基因突变情况,检测不同临床病理特征患者TP53和KRAS基因突变情况。结果:在112例消化系统肿瘤样本中共检测到276个突变,其中突变率最高的是TP53基因(67%),其次是KRAS基因(34%)。TP53基因在COAD中突变最为显著,其次是LIHC;KRAS基因在PAAD中突变最明显。TP53基因突变主要发生在5～8号外显子上,KRAS基因突变主要发生在2号外显子上。6类消化系统肿瘤中TP53基因突变率比较差异无统计学意义(P>0.05),KRAS基因突变率比较差异有统计学意义(P<0.05)。6类消化系统肿瘤中TP53和KRAS基因共同突变的突变率比较差异有统计学意义(P<0.05)。高TMB和低TMB患者TP53及KRAS基因突变率比较差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、有无淋巴结和(或)远处转移及MSI患者的TP53及KRAS基因突变率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:常见消化系统肿瘤中TP53和KRAS基因突变率较高,TP53和KRAS基因突变率与患者肿瘤类型和TMB有一定关联。
2025年02期 v.51;No.312 471-478页 [查看摘要][在线阅读][下载 1271K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：14 ] - 穆华夏;卜伟晓;丁淑婷;高梦瑶;苏维强;张震;薄其付;刘峰;石福艳;王清华;孔雨佳;王素珍;
目的:基于双向两样本孟德尔随机化(MR)分析,探索胰岛素样生长因子1 (IGF-1)与结直肠癌(CRC)之间的因果关联。方法:基于已公开的全基因组关联研究(IEU OpenGWAS)项目的公开汇总数据进行双向两样本MR分析,采用逆方差加权法(IVW)作为主要分析方法,采用加权中位数法(WM)、MR-Egger回归法、加权众数法(WME)和简单众数法(SM)进行辅助分析,以评估IGF-1对CRC的因果影响;通过敏感性分析检查结果的稳健性。结果:以IGF-1作为暴露因素共筛选到386个单核苷酸多态性(SNPs)作为工具变量(IVs)。MR分析,IGF-1与CRC之间存在正向因果关联,比值比(OR)为1.178,95%置信区间(CI)为1.092～1.272,P<0.001;且该因果关联在校正了身高后仍然存在[OR (95%CI)=1.214 (1.111,1.327),P<0.001]。Cochran's Q检验显示IV之间存在异质性(P<0.05),MR-Egger回归法未发现IV的水平多效性(P>0.05)。留一法逐个剔除SNPs后,结果显示该因果关联稳健。反向MR分析显示IGF-1与CRC之间不存在反向因果关系[OR (95%CI)=1.017 (0.997,1.037),P=0.103]。结论:IGF-1水平与CRC之间存在因果关联,高IGF-1水平是CRC的潜在风险因素。
2025年02期 v.51;No.312 479-485页 [查看摘要][在线阅读][下载 1139K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：18 ] - 耿海营;于焱;代春美;温有锋;李宁;
目的:探讨三重基序蛋白24 (TRIM24)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达,阐明TRIM24蛋白与ccRCC患者临床病理特征和预后的关联。方法:选取术前均未行放化疗的90例ccRCC患者的癌组织和癌旁正常组织。采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测ccRCC组织中TRIM24蛋白表达水平,分析ccRCC组织与癌旁正常组织中TRIM24蛋白表达水平的差异。计算TRIM24蛋白表达评分及其平均值,并根据平均值将ccRCC患者分为TRIM24蛋白低表达组和TRIM24蛋白高表达组;分析TRIM24蛋白表达水平与患者不同临床病理特征之间的关联,分析TRIM24蛋白表达水平与患者预后之间的关系。结果:免疫组织化学法,TRIM24蛋白在ccRCC患者癌组织细胞核和细胞质中均有表达,且癌组织中TRIM24蛋白表达水平与癌旁正常组织比较差异均有统计学意义(P<0.05);ccRCC组织细胞核中TRIM24蛋白表达水平与患者年龄、性别和肿瘤大小有关联(P<0.05);KaplanMeier生存分析,TRIM24蛋白在ccRCC组织细胞质中高表达、年龄大和病理分级高的患者总生存期短于TRIM24蛋白低表达、年龄小和病理分级低的患者(P<0.05);多因素Cox回归分析,与TRIM24蛋白低表达和病理分级低的患者比较,ccRCC组织细胞质中TRIM24蛋白高表达和病理分级高的患者预后较差(P<0.05)。结论:ccRCC癌组织的细胞质中TRIM24高表达和病理分级高的患者术后生存率较低,预后较差。
2025年02期 v.51;No.312 486-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 1207K] [下载次数：26 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：15 ]