- 王岚;朱国双;孙龙;王小琴;
目的:通过高磷诱导db/db糖尿病肾病(DN)小鼠血管钙化,探讨肾元颗粒对db/db DN小鼠血管钙化的改善作用及其可能机制。方法:将20只SPF级db/db小鼠随机分为模型组和肾元颗粒组(n=10),同系背景野生型(WT)小鼠作为空白组(n=10)。给药12周后,取各组小鼠血清、肾脏和胸主动脉组织。ELISA法检测各组小鼠血清FGF23水平,HE和von Kossa法检测各组小鼠胸主动脉病理形态表现以及钙盐沉积情况,实时荧光定量PCR (Real-time PCR)法检测各组小鼠肾脏组织中Klotho mRNA和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22αmRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肾脏组织中Klotho蛋白和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22α蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠胸主动脉组织中Pit-1蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组小鼠胸主动脉组织中SM22α和Runx2蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清FGF23水平明显升高(P<0.05),肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),胸主动脉组织中Pit-1和Runx2mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),SM22αmRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),胸主动脉组织中Pit-1和Runx2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),SM22α蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,肾元颗粒组小鼠血清FGF23水平降低(P<0.05),肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),胸主动脉组织中Pit-1和Runx2mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),胸主动脉组织中SM22αmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:肾元颗粒可通过上调小鼠肾脏组织中Klotho蛋白表达水平,减少Pit-1表达水平,抑制FGF23/Pit-1信号通路,调节血管平滑肌细胞(VSMC)的表型转化,达到血管保护作用。
2020年03期 v.46;No.283 431-438+669页 [查看摘要][在线阅读][下载 1012K] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：14 ] - 王欣欣;李思佳;关洪全;侯殿东;
目的:采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)致敏BALB/c小鼠诱导小鼠发生特应性皮炎(AD),阐明DNCB作为半抗原诱导AD的可能致病机制。方法:12只BALB/c小鼠随机分为对照组和AD模型组,每组6只。于实验第1、4、7天,采用1.0%DNCB溶液涂抹于AD模型组小鼠背部皮肤进行致敏,于实验第14、17、19、22、24、27和29天,采用0.5%DNCB溶液涂抹于AD模型组小鼠左耳背部皮肤进行激发。对照组小鼠于相同时间点外用等体积基质溶液。评价2组小鼠皮肤组织炎症评分,观察2组小鼠耳部皮肤外观变化,HE染色和甲苯胺蓝染色观察2组小鼠左耳皮损部位皮肤组织病理形态表现,测量皮损处皮肤组织上皮层厚度,计数皮损处皮肤组织中肥大细胞数,免疫组织化学染色法检测2组小鼠皮损处皮肤组织中白细胞介素4 (IL-4)表达水平;ELISA法检测2组小鼠血清IgE水平。结果:AD模型组小鼠皮肤组织炎症评分明显高于对照组(P<0.01),小鼠左耳部皮肤明显红肿、变硬,伴随出现异常的搔抓行为;AD模型组小鼠皮损处皮肤组织上皮层厚度、浸润肥大细胞数、皮损处皮肤组织中IL-4表达水平和血清IgE水平均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:外用1.0%DNCB致敏和外用0.5%DNCB激发BALB/c小鼠能够成功诱导AD,其机制可能与二者引起皮肤组织中IL-4表达水平和血清IgE水平升高有关。
2020年03期 v.46;No.283 439-443+669页 [查看摘要][在线阅读][下载 615K] [下载次数：30 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：9 ] - 陈少凤;李胜男;邓福;朱佩仪;李友;
目的:构建RHBDF2基因过表达慢病毒载体,建立稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞,为RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞的建立提供依据。方法:根据NCBI提供的RHBDF2基因序列,设计并合成引物,PCR扩增RHBDF2基因后通过Gateway克隆技术将目的基因克隆至入门载体,再亚克隆至慢病毒载体pLV [Exp]-EGFP,构建重组慢病毒质粒pLV [Exp]-EGFP-RHBDF2;将慢病毒表达载体质粒pLV [Exp]-EGFP和重组慢病毒质粒pLV [Exp]-EGFP-RHBDF2分别与慢病毒辅助包装质粒共转染HEK293T细胞,包装慢病毒并测定慢病毒滴度;将感染pLV [Exp]-EGFP-control的EA.hy926细胞作为对照组,感染pLV [Exp]-EGFP-RHBDF2的EA.hy926细胞作为实验组,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞;荧光定量PCR (qPCR)和Western blotting法检测对照组和实验组EA.hy926细胞中RHBDF2mRNA和蛋白表达水平。结果:酶切电泳和测序检测,实验组过表达慢病毒载体的基因序列与设计合成的序列完全一致;对照组包装的慢病毒滴度为1×108 TU·mL-1,实验组慢病毒的滴度为3×10~8 TU·mL~(-1);荧光显微镜下慢病毒成功感染EA.hy926细胞,感染率达95%以上;qPCR检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.01);Western blotting法检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:成功构建RHBDF2过表达慢病毒载体,利用pLV [Exp]-EGFP-RHBDF2慢病毒建立了稳定上调RHBDF2表达的EA.hy926细胞系。
2020年03期 v.46;No.283 444-450+669-670页 [查看摘要][在线阅读][下载 1326K] [下载次数：45 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：13 ] - 孔雯聪;贺武斌;苏荣健;贾答淇;谷艳娇;王月;杜晓媛;
目的:探讨巨噬细胞刺激1受体(MST1R)抑制剂BMS-777607对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用不同浓度BMS-777607处理乳腺癌MCF-7细胞,将细胞分为对照组(0μmol·L~(-1) BMS-777607组)和0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0及20.0μmol·L~(-1) BMS-777607组。采用MTT法检测各组MCF-7细胞增殖率,克隆形成实验检测各组MCF-7细胞存活率,EDU成像和EDU流式细胞术检测各组MCF-7细胞增殖率,Hoechst33342染色法检测各组MCF-7细胞凋亡形态表现,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组MCF-7细胞中ERK、p-ERK、Akt、p-Akt、PARP、Cleaved PARP、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平。结果:MTT检测,与对照组比较,5和10μmol·L~(-1)BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01)。克隆形成实验,与对照组比较,5和20μmol·L~(-1)BMS-777607组MCF-7细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01)。EDU掺入法检测,与对照组比较,10和20μmol·L~(-1) BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01)。Hoechst33342荧光染色,对照组MCF-7细胞核淡染,10μmol·L~(-1) BMS-777607组MCF-7细胞核少部分浓染、明亮,20μmol·L~(-1)BMS-777607组MCF-7细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。双染流式细胞术检测,与对照组比较,10和20μmol·L~(-1)BMS-777607组MCF-7细胞凋亡率降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,10、15和20μmol·L~(-1)BMS-777607组MCF-7细胞中p-ERK和p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),PARP、Cleaved PARP、Bax、Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:MST1R抑制剂BMS-777607能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与抑制p-ERK和p-Akt表达和促进Cleaved PARP、Bax、Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-3表达有关。
2020年03期 v.46;No.283 451-457+670页 [查看摘要][在线阅读][下载 1425K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 付鑫;龚福梅;丁宁;朱静;杨春光;胡学军;
目的:利用大肠杆菌(E.coli)高效制备类弹性蛋白(ELP)展示N端脑钠肽前体(NT-proBNP)双抗原表位的重组蛋白,为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据。方法:分别设计NT-proBNP第13～20位和第63～71位氨基酸残基表位,通过柔链连接上述2个抗原表位与ELP融合,获得3种融合蛋白。利用基因工程技术合成编码以上3种融合蛋白的基因并克隆到pET-28a (+)载体上,转入E.coli BL21 (DE3)自动诱导表达,利用多次可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白,并应用Western blotting和ELISA法检测其抗体特异结合表位的能力。结果:成功构建了3种ELP展示NT-proBNP抗原表位的载体,并在E.coli中表达获得相应重组蛋白。Western blotting和直接ELISA检测,ELP展示的特异抗原表位均具有良好的与相应抗体结合的能力。夹心ELISA法检测,ELP展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的蛋白浓度与450nm处吸光度(A)值呈双对数线性剂量依赖关系(r=0.919 7,P<0.01)。结论:成功利用ELP展示NF-proBNP双抗原表位,为低成本、高效地制备出与NT-proBNP检测校准品奠定了基础。
2020年03期 v.46;No.283 458-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 611K] [下载次数：14 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 徐凤英;刘儒;马丽;曲一帆;肖伟利;王玉珍;谢基明;
目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞中Rab7a基因敲除后相关基因表达的变化,阐明Rab7a相关基因在TNBC中的作用。方法:选取对数生长期的乳腺癌ZR-75-30、MCF-7、T-47D、MDAMB-231和HCC-1937细胞,采用Western blotting法检测乳腺癌ZR-75-30、MCF-7、T-47D、MDA-MB-231和HCC-1937细胞中Rab7a蛋白表达水平。慢病毒敲除TNBC MDA-MB-231细胞中Rab7a基因,分为阴性对照组和Rab7a基因敲除组,根据敲除的4种不同Rab7a序列分为KD1组、KD2组、KD3组和KD4组。采用qPCR法检测各组MDA-MB-231细胞中Rab7a基因敲除效率,全基因表达谱芯片检测Rab7a基因敲除效率最高组(KD2组)和阴性对照组差异基因,一体化通路分析(IPA)软件分析Rab7a基因与其他基因的相互作用。结果:在TNBC MDA-MB-231细胞中可见Rab7a蛋白表达。与阴性对照组比较,KD2组乳腺癌MDA-MB-231细胞中Rab7a基因敲除效率最高(P<0.01);与阴性对照组比较,KD2组乳腺癌MDA-MB-231细胞中有634个差异基因,其中上调基因和下调基因数均增多(P<0.01);差异基因分析,Rab7a基因敲除与癌症、细胞存活、细胞周期和细胞生长及转移等有密切联系;Rab7a的IPA网络图中eIF4F、IRS1和RPS6KB1表达下调,PRKAA1、IKBKE、VEGFA和转录因子ATF2表达上调。结论:Rab7a基因在TNBC MDA-MB-231细胞中以基因网络的形式发挥作用;Rab7a基因与多基因相互作用,参与癌细胞的病理过程。
2020年03期 v.46;No.283 464-469+671页 [查看摘要][在线阅读][下载 920K] [下载次数：12 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 陈玲萌;孟祥玥;张艳;桂玥;吴霜;李艳超;谭百宏;
目的:探讨癫痫持续状态(SE)后小鼠海马组织神经元中微管蛋白β-tubulin和内体-溶酶体系统表达的变化,阐明神经元迟发性死亡过程中微管和内体-溶酶体系统的变化规律。方法:40只雄性ICR小鼠分为对照组(n=7,给予生理盐水)和实验组(n=33,给予匹鲁卡品),实验组中达到SE标准的SE小鼠根据SE后时间分为SE 1d、SE 2d、SE 3d和SE 7d组(n=5)。Nissl和Fluoro-Jade B(F-JB)染色检测各组小鼠海马组织神经元损伤情况,免疫荧光法检测各组小鼠海马组织神经元中微管蛋白β-tubulin、内体蛋白Rab5和溶酶体结构蛋白LAMP1表达强度及β-tubulin、Rab5和LAMP1阳性面积百分比;双重荧光法检测各组小鼠海马组织CA1区β-tubulin与Rab5和LAMP1表达的关系。结果:与对照组比较,SE 1d组小鼠海马CA1和CA3区神经元数减少(P<0.01),F-JB阳性细胞数增加(P<0.01);SE 2d、SE 3d和SE 7d组小鼠海马组织中Nissl阳性神经元数明显减少(P<0.01)。与对照组比较,SE 2d、SE 3d和SE 7d组小鼠海马组织中F-JB阳性神经元数增加(P<0.01)。与对照组比较,SE 2d、SE 3d和SE 7d组小鼠海马CA1和CA3区神经元树突中β-tubulin阳性面积百分比明显降低(P<0.05),其变化趋势与神经元损伤相似。与对照组比较,SE 1d、SE 2d、SE 3d和SE 7d组小鼠海马组织神经元中Rab5和LAMP1表达强度随着时间延长呈下降趋势;Rab5阳性面积百分比明显降低(P<0.05或P<0.01);LAMP1阳性面积百分比在SE后第1天出现一过性增多,之后逐渐减少(P<0.05或P<0.01)。双重荧光染色检测,SE后1d是早期内体减少和溶酶体一过性增多的关键点,并与神经元微管损伤的出现时间极为一致。结论:SE引起神经元迟发性死亡的同时神经元微管骨架受损,内体-溶酶体系统的定位和功能也发生异常改变。
2020年03期 v.46;No.283 470-475+671-672页 [查看摘要][在线阅读][下载 1525K] [下载次数：42 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：2 ] - 林久涵;田琳;张娜娜;董营;吕航;王丹;曲萌;张勇;孙连坤;于春艳;刘希;
目的:探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法:将C57BL/6J (C57)和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。光学显微镜观察2组小鼠肿瘤组织形态表现,Western blotting法检测2组小鼠肿瘤组织中线粒体融合蛋白2 (Mfn2)、动力相关蛋白1 (Drp1)、线粒体分裂蛋白1 (Fis1)、泛素化及多泛素化蛋白、LC3、PINK1及Parkin蛋白表达水平。结果:C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组小鼠皮肤下均见肿瘤组织,肿瘤细胞内呈现黑色素颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤组织体积小(P<0.05)。小鼠肿瘤组织中Mfn2表达水平降低(P<0.05),Fis1和Drp1表达水平升高(P<0.05),泛素化及多聚泛素化蛋白、LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:APP/PS1小鼠移植瘤模型肿瘤生长缓慢,其机制可能与PINK1/Parkin通路参与线粒体自噬有关。
2020年03期 v.46;No.283 476-481+672页 [查看摘要][在线阅读][下载 1137K] [下载次数：24 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 商浩;李春森;李锋;刘春霞;
目的:探讨microRNA-9-5p (miR-9-5p)靶向肌细胞增强因子2C (MEF2C)对腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)细胞生物学行为的影响,为ARMS的分子诊断和靶向治疗提供依据。方法:qRT-PCR法检测ARMS组织和细胞中miR-9-5p和MEF2CmRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因检测293T细胞中荧光素酶活性,Western blotting法检测细胞中MEF2C蛋白表达水平。结果:ARMS组织和细胞中miR-9-5p表达水平高于正常骨骼肌组织和HSKMC细胞(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中miR-9-5p表达水平降低(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭和迁移数降低(P<0.05)。加入miR-9-5p后,共转染MEF2C-3′-UTR-WT的293T细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01);与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中MEF2CmRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。ARMS组织中MEF2C mRNA表达水平低于正常骨骼肌组织(P<0.01),且与ARMS组织中miR-9-5p表达呈负相关关系(r=-0.542,P<0.05);RH30细胞和PLA802细胞中MEF2CmRNA表达水平低于HSKMC细胞(P<0.01)。与转染对照质粒(EV)比较,转染MEF2C过表达质粒后RH30细胞中MEF2CmRNA表达水平升高(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),细胞迁移数降低(P<0.01)。与转染si-NC比较,转染MEF2CsiRNA后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭数升高(P<0.01),细胞迁移数升高(P<0.01)。结论:miR-9-5p通过直接靶向MEF2C mRNA的3′-UTR诱导mRNA降解而抑制MEF2C表达,从而促进RH30细胞的增殖、侵袭、迁移以及抗凋亡能力。
2020年03期 v.46;No.283 482-491+672-673页 [查看摘要][在线阅读][下载 2918K] [下载次数：18 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 闫广兴;叶佳朋;王爽爽;刘苍维;周怡君;胡月;郝新青;杜奥博;史册;孙宏晨;
目的:观察Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素Ⅰ型受体(ACVR1)对出生后小鼠下颌骨髁突软骨(MCC)细胞形态、增殖和分化的影响,为研究MCC相关性疾病的病因及治疗提供参考。方法:采用Cre-LoxP系统构建在C57BL/6J小鼠MCC细胞中条件性敲除ACVR1基因的动物模型。将基因型为Acvr1fx/fx;RS/RS和Acvr1+/-;Osterix (+)/(-)的雌性和雄性小鼠配对合笼,以子代Osterix-Cre(+);Acvr1fx/-;RS/+基因型小鼠为实验组,Osterix-Cre(+);Acvr1fx/+;RS/+小鼠为对照组。分别取新出生(n=3)、出生后21天(PN21)(n=4)和出生后42天(PN42)(n=5)雄性小鼠,X-gal染色检测MCC组织中Osterix-Cre表达,micro-CT法检测2组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度,HE染色和甲苯胺蓝染色分析2组小鼠MCC细胞形态及各层软骨厚度,免疫组织化学(IHC)染色检测2组小鼠MCC组织中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和Ⅹ型胶原水平。结果:X-gal染色和IHC染色,ACVR1条件性基因缺失小鼠模型构建成功。在PN21时,与对照组比较,实验组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度明显变短(P<0.05);2组小鼠MCC细胞形态表现和结构无明显差异。与对照组比较,实验组小鼠肥大软骨细胞层(Hy)和成软骨细胞层(Ch)这2层及Hy单层MCC组织中PCNA阳性细胞数明显增多(P<0.05或P<0.01)。在PN42时,与对照组比较,实验组小鼠部分下颌骨髁突软骨细胞形态异常,部分髁突肥大软骨细胞的排列紊乱,实验组小鼠髁突软骨前1/3区的Hy和中1/3区除Hy以外的其他层细胞厚度明显增大(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,实验组小鼠MCC组织各层PCNA阳性细胞数和Ch中Ⅹ型胶原水平明显升高。结论:ACVR1通过抑制MCC细胞增殖和成软骨细胞向肥大软骨细胞的分化,从而影响MCC细胞形态及MCC组织结构。
2020年03期 v.46;No.283 492-497+673页 [查看摘要][在线阅读][下载 717K] [下载次数：7 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 王映映;孙利娟;范紫微;古虹;游先梅;关天昊;张成义;陈曦;
目的:探讨黄芩苷通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素(PI3k/Akt/mTOR)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的影响,并阐明其作用机制。方法:将对数生长期大鼠滑膜RSC-364细胞分为对照组、模型组、地塞米松(DXMS)组、10μmol·L~(-1)黄芩苷组、20μmol·L~(-1)黄芩苷组和40μmol·L~(-1)黄芩苷组。对照组RSC-364细胞只加入培养基,其他各组RSC-364细胞均采用1mg·L~(-1) LPS体外刺激12h制作炎症细胞模型。采用MTT法检测各组RSC-364细胞存活率,RT-PCR法检测各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1和微管相关蛋白-轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组RSC-364细胞中Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组RSC-364细胞存活率明显升高(P<0.01),模型组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度黄芩苷组RSC-364细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可能通过激活PI3k/Akt/mTOR信号通路抑制LPS诱导的RSC-364细胞自噬。
2020年03期 v.46;No.283 498-503页 [查看摘要][在线阅读][下载 1036K] [下载次数：36 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ] - 潘永生;邝融;孙铎;毛天娇;姜可新;李江;
目的:探讨美学区切牙拔牙创大鼠模型的建立和改良微创拔牙手术的应用效果,为建立美学区切牙拔牙创模型及提高牙槽骨和软组织愈合效果提供依据。方法:24只SD大鼠随机分为实验组和对照组(n=12),分别在手术前的第9、6和3天沿着牙龈组织上方磨除大鼠右下切牙的牙冠组织,在建模的第10天进行切牙拔除手术。对照组大鼠采用常规切牙拔除手术,实验组大鼠采用改良的微创手术方式拔除切牙。观察切牙拔除手术前后2组大鼠存活率和体质量,检测2组大鼠切牙拔除的完整程度,并计算切牙完整拔除率,比较实验组与对照组大鼠在切牙拔除手术后1周拔牙创周围软组织的愈合情况以及术后4周大鼠下颌切牙牙槽骨愈合情况。结果:实验组大鼠存活率高于对照组(P<0.05)。术后各时间点实验组大鼠体质量高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,实验组大鼠切牙完整拔除率升高(P<0.01)。实验组大鼠拔牙创周围软组织在拔牙后1周内完全愈合,4周后在牙槽脊顶具有大量的新生骨;对照组大鼠在拔牙后1周拔牙创周围软组织仍有红肿现象,拔牙后4周牙槽骨的牙槽脊顶处骨小梁结构紊乱,新生骨结构不良。结论:改良微创拔牙手术可以明显改善大鼠切牙的完整拔除效果,术后拔牙创周围软组织和牙槽骨在相应时间内愈合良好。
2020年03期 v.46;No.283 504-508+674页 [查看摘要][在线阅读][下载 727K] [下载次数：2 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 孔维健;方红娟;潘肃;杨利丽;郑爽;齐治平;付川;钟磊;
目的:探讨搭载不同浓度紫杉醇脂质体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)静电纺丝膜对神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响,评价载有紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤组织工程修复中应用的可行性。方法:将紫杉醇脂质体和PLGA以不同比例混合,利用静电纺丝技术分别构建1、5和10μg·L~(-1)紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜。从胎鼠大脑组织中分离纯化NSCs。扫描电镜(SEM)检测各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径,免疫荧光染色鉴定分离纯化所得的NSCs。将NSCs分别培养在含有不同浓度(0、1、5和10μg·L~(-1))紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜的培养基中(作为纯PLGA静电纺丝膜组和1、5及10μg·L~(-1)紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组),MTT法检测各组NSCs增殖活性,RT-PCR法检测各组NSCs中Tuj-1和GFAP mRNA表达水平。结果:紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜呈白色薄膜状。SEM检测,各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色,从胎鼠脑组织中分离出的细胞呈球状,所有细胞均有Nestin蛋白阳性表达。MTT法检测,5μg·L~(-1)紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs增殖活性高于其他3组(P<0.05)。RT-PCR检测,与纯PLGA静电纺丝膜组比较,5μg·L~(-1)紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs中Tuj-1mRNA表达水平升高(P<0.05),GFAP mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:中等浓度紫杉醇能够促进NSCs增殖,诱导NSCs向神经元分化。载有中等浓度紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤修复中有一定的应用价值。
2020年03期 v.46;No.283 509-514+674页 [查看摘要][在线阅读][下载 911K] [下载次数：42 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 刘东宁;杨明锡;刘歆婵;李艳;武洲;于维先;
目的:通过水热法合成锌掺杂碳点(CDs),观察锌掺杂CDs联合蓝光对金黄色葡萄球菌及其生物膜形成的抑制作用,并初步探讨相关机制。方法:采用水热法合成锌掺杂CDs,采用透射电子显微镜(TEM)、荧光光谱和傅立叶红外光谱仪(FT-IR)观察其表征。实验分为空白对照组、单独CDs溶液组、单独蓝光照射组和CDs+蓝光照射组。单独CDs溶液组细胞采用不同浓度(50、75和100mg·L~(-1))CDs溶液处理,单独蓝光照射组采用蓝光照射10、20和40min,CDs+蓝光照射组采用上述浓度CDs溶液处理后,按上述时间进行蓝光照射,空白对照组仅采用培养基处理后避光培养。CCK-8法检测各组L929和MC3T3-E1细胞增殖率。选取抑菌效果最佳组(100 mg·L~(-1) CDs组)采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理清除活性氧,实验分为对照组、100mg·L~(-1) CDs组、0.5mmol·L~(-1) NAC组和0.5mmol·L~(-1) NAC+100mg·L~(-1) CDs组,采用分光光度法测定各组菌液浓度,采用结晶紫法检测各组金黄色葡萄球菌生物膜形成量,采用平板菌落计数法记录各组菌落数。结果:TEM检测,成功合成粒径约1.8nm的锌掺杂CDs。荧光光谱检测,CDs最佳激发波长为342nm,最佳发射波长为440nm,且具有激发依赖性。FT-IR检测,CDs具有羟基、羧基和氨基等官能团。CCK-8法检测,共培养24h时,100mg·L~(-1) CDs组L929和MC3T3-E1细胞增殖率均达80%。光照20和40min时,与空白对照组比较,单独蓝光照射组菌液浓度降低(P<0.05或P<0.01),光照40min时金黄色葡萄球菌生物膜形成量减少(P<0.01)。光照10min时,与单独蓝光照射组比较,CDs+蓝光照射组菌液浓度和生物膜形成量均降低(P<0.01);与100mg·L~(-1) CDs组比较,0.5mmol·L~(-1) NAC+100mg·L~(-1) CDs组菌液浓度和生物膜形成量明显增加(P<0.01)。结论:锌掺杂CDs联合蓝光后通过光催化作用能有效抑制金黄色葡萄球菌的生长和生物膜形成。
2020年03期 v.46;No.283 515-522+674页 [查看摘要][在线阅读][下载 1148K] [下载次数：25 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 文庆一;焦苗苗;谢潇;彭敬予;董凤歌;魏雪;杨明;
目的:观察双硫仑(DSF)和顺铂(CDDP)联合使用对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,并探讨其可能机制。方法:将MDA-MB-231细胞分为空白对照组、2μmol·L~(-1) DSF组、60μmol·L~(-1) CDDP组和联合组(60μmol·L~(-1) CDDP+1、2和4μmol·L~(-1) DSF)。MTT法检测各组MDAMB-231细胞的存活率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞中活性氧(ROS)水平;电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测各组MDA-MB-231细胞中铂(Pt)水平。结果:MTT法和流式细胞术检测,作用72h后,与60μmol·L~(-1) CDDP组比较,联合1组(60μmol·L~(-1)CDDP+1μmol·L~(-1) DSF)、联合2组(60μmol·L~(-1) CDDP+2μmol·L~(-1) DSF)和联合3组(60μmol·L~(-1)CDDP+4μmol·L~(-1) DSF)MDA-MB-231细胞存活率降低(P<0.05)。作用24h后,与60μmol·L~(-1) CDDP组和2μmol·L~(-1) DSF组比较,联合组(60μmol·L~(-1) CDDP+2μmol·L~(-1) DSF)MDA-MB-231细胞凋亡率升高(P<0.05)。流式细胞术检测,与CDDP组比较,联合组(60μmol·L~(-1) CDDP+2μmol·L~(-1) DSF)MDA-MB-231细胞中ROS水平升高(P<0.05)。ICP-MS检测,与CDDP组比较,联合组(20μmol·L~(-1) CDDP+0.625μmol·L~(-1) DSF)TNBC MDA-MB-231细胞中Pt水平升高(P<0.05)。结论:DSF与CDDP联合使用能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖,其可能机制是通过提高MDA-MB-231细胞中ROS水平和Pt水平抑制肿瘤细胞生长。
2020年03期 v.46;No.283 523-529页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K] [下载次数：31 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 石光环;周世平;徐东升;王琇;
目的:探讨扩增的自然杀伤(NK)细胞对胃癌细胞的杀伤作用,阐明其作用机制。方法:提取和分离15例胃癌患者外周血单个核细胞(PBMCs)。观察扩增前后NK细胞形态表现,检测扩增前后NK细胞百分比,计算扩增后NK细胞扩增倍数,检测扩增前后NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1以及抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1的表达百分比。结果:扩增前NK细胞呈圆形,细胞体积比较小,细胞呈散在分布,扩增后NK细胞体积明显增大,细胞呈不规则形态。扩增后NK细胞百分比明显高于扩增前(P<0.01),扩增后NK细胞数是扩增前的(596±152)倍。在效靶比为5∶1时,扩增后NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性明显强于扩增前(P<0.01)。扩增后NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1表达百分比明显高于扩增前(P<0.01)。扩增后NK细胞表面抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1表达百分比明显低于扩增前(P<0.05)。结论:扩增后NK细胞对胃癌细胞杀伤作用明显强于扩增前,其机制可能与扩增后NK细胞表面活化性受体表达升高和抑制性受体表达降低有关联。
2020年03期 v.46;No.283 530-535+674页 [查看摘要][在线阅读][下载 1264K] [下载次数：17 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 冯磊;张韩特;李响;孟繁平;李妍;
目的:探讨白细胞介素4 (IL-4)协同雌二醇对小鼠乳腺癌4T1细胞对其生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养4T1细胞,加入不同浓度(0、12.5、25.0、50.0和100.0μg·L~(-1))IL-4或雌二醇(0、6.25、12.50、25.00、50.00nmol·L~(-1)),作用72h后MTT法检测乳腺癌4T1细胞增殖率。将乳腺癌4T1细胞分为对照组(不进行任何处理)、IL-4组(加入50.0μg·L~(-1) IL-4)、雌二醇组(加入12.50nmol·L~(-1)雌二醇)和联合组(加入50.0μg·L~(-1) IL-4+12.50nmol·L~(-1)雌二醇),MTT法检测各组乳腺癌4T1细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期乳腺癌4T1细胞百分比,Western blotting法检测各组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、Erk、p-Erk、P70S6K、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平。结果:与0μg·L~(-1)IL-4组比较,25.0、50.0和100.0μg·L~(-1)IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高(P<0.05)。与0nmol·L~(-1)雌二醇组比较,12.50、25.00、50.00nmol·L~(-1)雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高(P<0.05)。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高(P<0.05);与对照组比较,雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高(P<0.05);与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞增殖率升高(P<0.05)。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中S期和G2/M期细胞百分比升高(P<0.05),G0及G1期细胞百分比降低(P<0.05);雌二醇组乳腺癌4T1细胞中S期细胞百分比明显升高(P<0.05),G0及G1期细胞百分比降低(P<0.05)。与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞中S期和G2/M期细胞百分比升高(P<0.05),G0及G1期细胞百分比降低(P<0.05)。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高,雌二醇组乳腺癌4T1细胞中p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平升高(P<0.05);联合组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:IL-4协同雌二醇可促进小鼠4T1乳腺癌细胞膜IL-4受体(IL-4R)和雌激素受体(ER)表达,增强乳腺癌4T1细胞中Erk1和p70S6K激酶的激活及下游分子S6蛋白的磷酸化。
2020年03期 v.46;No.283 536-542页 [查看摘要][在线阅读][下载 551K] [下载次数：12 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：8 ] - 杜静海;陈春悠;郭欣;张静;
目的:探讨赖氨酸乙酰基转移酶(Kat5)对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法:RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组(si-Kat5组)。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2 (CDK2)、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)、PI3K、磷酸化PI3K (p-PI3K)、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白水平。结果:甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞(P<0.05)。各组TPC-1细胞中Kat5mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05),P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。
2020年03期 v.46;No.283 543-550+674页 [查看摘要][在线阅读][下载 1075K] [下载次数：9 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：7 ] - 卜一;张硕;钱旭东;王红梅;窦志杰;
目的:探讨半乳糖凝集素3 (Galectin-3)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)在急性脑梗死小鼠脑组织中的表达及尼莫地平的干预作用,阐明Galectin-3和MMP-9在脑梗死发病和治疗中的作用。方法:将210只小鼠随机分为对照组、模型组和尼莫地平组,每组70只。模型组和尼莫地平组小鼠采用线栓法建立急性脑梗死模型,尼莫地平组小鼠于术前30min腹腔注射尼莫地平。Longar评分和改良神经功能缺损评分(mNSS)评价各组小鼠神经功能,TTC染色检测各组小鼠脑梗死体积,检测各组小鼠脑组织含水量,HE染色观察各组小鼠脑组织形态学表现,RT-PCR法检测各组小鼠脑组织中Galectin-3和MMP-9mRNA表达水平,免疫组织化学染色测定各组小鼠脑组织中Galectin-3和MMP-9蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠Longar评分和mNSS升高(P<0.05),脑梗死体积和脑组织含水量明显升高(P<0.05),脑组织中Galectin-3和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05),脑组织中Galectin-3和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组小鼠Longar评分和mNSS评分降低(P<0.05),脑梗死体积和脑组织含水量降低(P<0.05),脑组织中Galectin-3和MMP-9mRNA表达水平降低(P<0.05),脑组织中Galectin-3和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。对照组小鼠脑细胞形态和结构正常;模型组小鼠脑细胞出现水肿和片状坏死,可见炎细胞浸润;尼莫地平组小鼠脑细胞水肿和坏死较轻。结论:尼莫地平可通过降低脑组织Galectin-3和MMP-9表达发挥对脑梗死小鼠脑组织的保护作用。
2020年03期 v.46;No.283 551-556+674-675页 [查看摘要][在线阅读][下载 1168K] [下载次数：20 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 焦光美;单海雷;张晓璇;赵亮;窦志杰;康玲伶;马征;孙艳军;杨宁;
目的:探讨舒血宁注射液对急性脑梗死大鼠脑组织的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组和舒血宁注射液组(n=10)。模型组、尼莫地平组和舒血宁注射液组采用颈内动脉线栓法建立急性脑梗死大鼠模型。假手术组大鼠分离颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉后,只结扎颈外动脉;对照组大鼠不作手术处理。舒血宁注射液组大鼠造模成功后给予舒血宁注射液,尼莫地平组大鼠造模后给予尼莫地平,对照组、模型组和假手术组大鼠给予等体积生理盐水。检测各组大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量和相对脑梗死面积,HE染色观察各组大鼠脑组织形态表现,免疫组织化学染色检测各组大鼠脑组织中生长分化因子15 (GDF-15)和C反应蛋白(CRP)表达水平,ELISA法检测各组大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果:对照组和假手术组大鼠脑皮层结构完整,细胞排列整齐;模型组大鼠神经细胞胞浆和胞核皱缩,神经细胞与毛细管周围间质疏松;舒血宁注射液组大鼠脑皮质神经细胞、神经胶质细胞肿胀程度及间质疏松程度均减轻,病理组织形态表现与尼莫地平组相近。与对照组和假手术组比较,模型组大鼠脑组织含水量升高(P<0.05),脑组织中CRP表达水平和TNF-α、IL-6和IL-1β水平升高(P<0.05),GDF-15表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组和舒血宁注射液组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.05),脑组织含水量明显降低(P<0.05),相对脑梗死面积减小(P<0.05),脑组织中CRP表达水平和TNF-α、IL-6及IL-1β水平均明显降低(P<0.05),GDF-15表达水平明显升高(P<0.05)。与尼莫地平组比较,舒血宁组大鼠神经功能缺损评分,脑组织含水量,相对脑梗死面积,脑组织中CRP和GDF-15表达水平及TNF-α、IL-6、IL-1β水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:舒血宁注射液可上调急性脑梗死大鼠脑组织GDF-15表达,抑制CRP表达,降低细胞炎性因子水平,改善神经功能,对急性脑梗死起保护作用。
2020年03期 v.46;No.283 557-562+675页 [查看摘要][在线阅读][下载 658K] [下载次数：11 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 高瑞敏;康玲玲;
目的:观察三七总皂苷对慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠心功能的改善作用,探讨其可能机制。方法:采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型。将60只模型大鼠随机分为模型组,阳性对照组,低、中和高剂量三七总皂苷组,每组12只;另取12只大鼠作为假手术组。彩色多普勒超声检测大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室后壁舒张期厚度(LVPWD)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左室舒张末压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dt max)和左心室压力最大下降速率(-dp/dt max),HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK (p-JNK)、p38和p-p38蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6 (IL-6)水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显升高(P<0.05),LVEF、CO、LVSP及+dp/dt max明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显降低(P<0.05),LVEF、CO、LVSP和+dp/dt max明显升高(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞肥大、坏死,心肌纤维排列不规则,出现炎性细胞浸润,大量心肌细胞凋亡,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌组织结构较完整,心肌细胞肥大减轻,心肌纤维排列疏松。与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显升高(P<0.05),血清TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05),心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显降低(P<0.05),血清TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05)。结论:三七总皂苷可通过下调心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平,抑制血清炎性因子分泌,从而抑制心肌细胞调亡,对CHF有一定的改善作用。
2020年03期 v.46;No.283 563-568+675-676页 [查看摘要][在线阅读][下载 1308K] [下载次数：39 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 毕勇志;马芬;时俊霞;宋琳琳;李林泽;
目的:探讨大黄素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用,阐明其作用机制。方法:将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(给予生理盐水),模型组(给予生理盐水,建模),阳性对照组(给予5mg·kg-1地塞米松,建模),低、中和高剂量大黄素组(给予10、20和40mg·kg-1大黄素,建模)(n=10)。采用大脑中动脉阻断法(MCAO)建立局灶性脑缺血大鼠模型。检测各组大鼠行为学评分,采用TTC染色法检测各组大鼠脑梗死体积百分比,ELISA法检测各组大鼠缺血侧海马组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL~(-1)β)和白细胞介素6 (IL-6)水平,Western blotting法检测各组大鼠缺血侧海马组织中核转录因子κB (NF-κB)p65和核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠未发现神经功能缺损症状和脑梗死;与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧海马组织中IL-6、IL~(-1)β和TNF-α水平明显升高(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05),IκBα蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组,中和高剂量大黄素组大鼠行为学评分降低(P<0.05),脑梗死体积百分比明显减小(P<0.05),缺血侧海马组织中IL-6、IL~(-1)β和TNF-α水平明显降低(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与低剂量大黄素组比较,中和高剂量大黄素组大鼠行为学评分降低(P<0.05)、脑梗死体积百分比明显减小(P<0.05),缺血侧海马组织中IL-6、IL~(-1)β和TNF-α水平明显降低(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:大黄素对大鼠局灶性脑缺血损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路和降低炎症因子分泌有关。
2020年03期 v.46;No.283 569-574+676页 [查看摘要][在线阅读][下载 736K] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：6 ] - 闫圣玉;谢亚锋;许志杰;刘英;丁雅婷;张侨;刘菀莹;刘丽兵;
目的:探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法:构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机分为对照组(给予未经感染的HT-29细胞)、空载组(给予感染空载质粒的HT-29细胞)、LL-37过表达组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞)、AMPK抑制剂组[给予感染空载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2mg·kg-1(Dorsomorphin,Dor)]和联合组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2mg·kg-1 Dor),每组6只。采用结肠癌HT-29细胞复制结肠癌小鼠模型,观察各组小鼠肿瘤体积并绘制生长曲线,感染24d后剥离肿瘤测量质量并计算抑瘤率,TUNEL染色检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ及AMPK/mTOR通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR表达水平。结果:与对照组和空载组比较,LL-37过表达组小鼠结肠癌HT-29细胞中LL-37mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),肿瘤质量和体积明显降低(P<0.05),抑瘤率升高(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值均明显升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显降低(P<0.05);与空载组比较,AMPK抑制剂组小鼠肿瘤质量和体积明显升高(P<0.05)、抑瘤率降低(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.05);与LL-37过表达组比较,联合组小鼠肿瘤组织中Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05或P<0.01),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.01)。结论:抗菌肽LL-37能激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,进而抑制结肠癌HT-29荷瘤小鼠的肿瘤生长。
2020年03期 v.46;No.283 575-581+676页 [查看摘要][在线阅读][下载 1241K] [下载次数：22 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ] - 翟云;王雅菲;托娅;
目的:探讨给予乳双歧杆菌M8后免疫抑制模型大鼠淋巴细胞亚群百分比、T淋巴细胞转化增殖活性、血清免疫球蛋白和细胞因子表达水平,阐明乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响。方法:50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量乳双歧杆菌M8组、中剂量乳双歧杆菌M8组和高剂量乳双歧杆菌M8组,每组10只。各组大鼠适应性灌服益生菌乳双歧杆菌M8 6d,第7天开始除空白对照组外,其余4组大鼠每日给予环磷酰胺(CTX),连续3d,构建大鼠免疫抑制模型,造模完成后低、中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠给予0.01、0.10和1.00g乳双歧杆菌M8,空白对照组和模型对照组大鼠灌服等体积无菌生理盐水。流式细胞术检测各组大鼠全血淋巴细胞亚群(CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞)百分比,CCK-8法检测各组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性,ELISA法检测各组大鼠血清免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白G (IgG)、白细胞介素2 (IL-2)、白细胞介素6 (IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞和NK细胞百分比明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性降低(P<0.01);与模型对照组比较,中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性升高(P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平降低(P<0.01);与模型对照组比较,中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:灌服乳双歧杆菌M8可以提高免疫抑制模型大鼠的特异性和非特异性免疫应答调控能力,乳双歧杆菌M8对免疫抑制大鼠免疫调节有一定促进作用。
2020年03期 v.46;No.283 582-588页 [查看摘要][在线阅读][下载 1231K] [下载次数：32 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：5 ]